Практична робота №8

Екстракція пластидних пігментів з листків.

Пігменти з фото синтезуючих тканин екстрагують полярними розчинниками (етиловим спиртом, ацетоном), які руйнують їхній зв’язок з мембранами хлоропластів. При розтиранні матеріалу з неполярними розчинниками, які не здатні денатурувати білки, в екстракт переходить незначна кількість пігментів. Розтертий матеріал в спирті залишається зеленим і тоді, колив ньому спостерігається висока активність ферменту хлорофілази, яка відщеплює від хлорофілу спирт фітол. Тоді утворюється хлорофілід зеленого кольору з такими ж спектральними характеристиками, що і хлорофіли, але з гідрофільними властивостями. Тому хлорофілід не розчиняється в полярних розчинниках, а осад на фільтрі після екстракції фотосинтетичних пігментів залишається зеленим.

Мета роботи. Дослідити, що хлорофіли та каротиноїди не екстрагуються з фото синтезуючих тканин водою і неполярними ліофільними розчинниками. Їх повністю екстрагують етиловимспиртом або ацетоном, за винятком тих листків (персика, борщівника), для яких характерна висока активність ферменту хлорофілази.

Матеріали, обладнання.Листки пеларгонії, персика, борщівника, проростки гороху, кукурудзи, пшениці; ацетон, етиловий спирт, петролейний ефір або гексан, карбонат кальцію; порцелянові ступки, скляні палички, фільтри, колби, мірні пробірки, ножиці, свердла, терези з наважками.

Хід роботи.Листки різних рослин подрібнюють ножицями або скальпелями. Подрібнену наважку (0,2-0,5 г) розтирають в ступці, додаючи на кінчику скальпеля трохи СаСО3для нейтралізації кислот клітинного соку. Зволожують матеріал невеликою кількістю розчинника, розтирають до гомогенної маси і кількісно переносять на фільтр, змиваючи багаторазово ступку невеликимипорціями ацетону (варіант перший) і, нарешті, водою (варіант другий), петролейного ефіру (варіант третій) і, нарешті, водою (варіант четвертий). При цьому кожна група студентів працює з різними рослинами. В схему досліду доцільно включити листя борщівниката персика. Фільтр вставляють в пробірку, розчин відфільтровують. Роблять висновки про розчинність пластидних пігментів в різних розчинниках. Пояснюють одержані дані, враховуючи стан пігментів в хлоропластах та хімічну природу їх.