Практична робота №5

Визначення осмотичного тиску клітинного соку плазмолітичним методом.

Концентрацію клітинного соку, який являє собою розчин великої кількості різноманітних органічних та неорганічних сполук, можна визначити за його осмотичним потенціалом. Плазмолітичний метод визначення цього важливого фізіологічного показника полягає в тому, що зрізи досліджуваної тканини занурюють в розчин різних концентрацій і згодом проводять дослідження їх під мікроскопом для визначення ізотонічного розчину. Виходячи з того, що плазмоліз відбувається лише в гіпертонічних розчинах, знаходять таку концентрацію, при якій спостерігається початкова стадія плазмолізу не менш ніж в 50% клітин досліджуваної тканини. Ізотонічний розчин матиме середнє значення між цим розчином і наступним (менш концентрованим), в якому плазмоліз ще не відбувається.

Мета роботи.Визначення величини осмотичного тиску у рослин різних екологічних груп.

Матеріали, обладнання.1Мрозчин кухонної солі або сахарози, дистильована вода, піпетки, пробірки, леза, елодея, традесканція, синя цибуля, капуста, фільтрувальний папір, мікроскопи, предметні та накривні скельця, препарувальні голки.

Хід роботи.Виготовляють по 5 мл розчинів кухонної солі або сахарози серії концентрацій від 0,1 до 0,7 моль/л змішуванням відповідних об’ємів вихідного 1М розчину і води згідно з таблицею. Розчини зберігають в пронумерованих маленьких баночках, пробірках та інших зручних посудинах. Лезом виготовляють тоненькі зрізи з усіх рослинних об’єктів, які досліджуються. Зрізи на 1-2 хв переносять в охолоджену кип’ячену воду для видалення бульбашок повітря і поступово, з інтервалом в 2-3 хв, переносять у виготовлені розчини. При цьому зрізи обсушують на фільтрувальному папері. Зрізи занурюють в виготовлені розчини на 20 –30 хв. Розглядають зрізи під мікроскопом в краплині плазмолітика, в якому знаходився препарат. Послідовно переглядаючи препарати з усіх розчинів, встановлюють, при якій концентрації помітно початкову стадію плазмолізу, а при якій ні. Результати записують у графі таблиці значками +,_ . При визначенні ізотонічної концентрації вираховують осмотичний тиск клітинного соку за рівнянням Вант-Гоффа: Р =RTCj, де Р -= осмотичний тиск в мегапаскалях, МПа; R-універсальна газова стала, 0,0083 кДж/(град х моль); Т –абсолютна температура, 2730+t0C; С –концентрація, моль/л; j–ізотонічний коефіцієнт. Для неелектролітів j=1, а для розчинів електролітів (наприклад, кухонної солі) він має такі значення. Формулюють та записують висновки.