ЛАБОРАТОРНА РОБОТА 11.

ОДЕРЖАННЯ ВІЛЬНОГО ВІД ВІРУСІВ ПОСАДКОВОГО МАТЕРІАЛУ ЧАСНИКУ ЗА ДОПОМОГОЮ МІКРОРОЗМНОЖЕННЯ ЗДОРОВИХ РОСЛИН

МЕТА: оволодіти методикою одержання вільного від вірусів посадкового матеріалу часнику за допомогою мікророзмноження здорових рослин.

МАТЕРІАЛИ І УСТАТКУВАННЯ: рослини часнику із суцвіттям; бінокулярна лупа або мікроскоп біологічний порівняльний; стерилізовані скальпелі, препарувальні голки, бритвочки, затиснуті в тримачі; пробірки із стерильним поживним середовищем для культивування часнику; спиртівка; сірники; 96%-й спирт у фарфоровому стаканчику.

Пояснення

Способом in vitro розмножують рослини, одержані з верхівкової меристеми, або здорові рослини, які відібрані з частково уражених сортів, без ризику їх повторного зараження.

Як експлант при цьому використовують суцвіття або денце цибулини, тобто такі тканини, які містять меристематичні зони.

При використанні суцвіття спостерігається високий вихід рослин-регенерантів в озимого часнику (ярий часник суцвіть не формує), однак цей експлант пов’язаний із сезонністю і доступний обмежений період.

У часнику в основі квіток закладаються повітряні цибулини, які є органами його вегетативного розмноження. У культурі вони легко формують рослини при поміщенні на штучне поживне середовище відповідної рецептури, а також при створенні відповідних температурних умов та освітлення.

ХІД РОБОТИ

1. Для одержання регенерантів суцвіття стерилізують. З допомогою скальпеля відділяють від стрілки і звільняють від обгортки; частину бутонів зрізують.

2. Квітколоже поділяють на частини розміром приблизно 5 мм х 5 мм і висаджують їх на штучне поживне середовище. З одного суцвіття можна одержати більше 70 рослин.

3. Денце зубка як експлант зручне тим, що його можна вводити в культуру тканини в будь-який час року.

4. Денце цибулинок, які одержані в пробірці, також можна використовувати для розмноження в культурі in vitro.

5. Якщо цибулину, що досягла розміру 0,5-1,0 см, поділити на дві або чотири частини і порушити при цьому центральний конус наростання, то в пазухах лусок на середовищі, що сприяє пагоноутворенню, будуть формуватися регенеранти. Таким чином можна розмножувати рослини, обминаючи висаджування їх у ґрунт. Особливо це важливо для матеріалу, який звільнений від вірусу вірусної інфекції, оскільки при цьому виключається можливість повторного його зараження. Одна така цибулина має здатність регенерувати 3-9 рослин.

6. У часнику в пазухах соковитої луски зубка і зачаткових листків немає готових закладених пагонів. Щоб у денці часнику активізувати латеральну меристему, слід будь-яким способом порушити апікальне домінування.

7. Перед введенням у культуру денця часнику зубок звільняють від соковитої луски, основу його зачищають і верхню частину листків, які залишилися, зрізують. Потім денце (навіть при незначному його розмірі) розрізують вздовж по вертикалі, щоб зруйнувати центральну меристему. З висадженого цілого денця часнику росте один центральний пагін, а регенеранти не формуються. Шляхом простого прийому – травмування центральної точки росту – можна отримати до 16-20 пагонів з одного денця.

8. Для одержання регенерантів часнику в склад поживного середовища (крім мінеральних солей і сахарози) додають вітаміни і стимулятори росту (БАП – 4 мг/л і НОК – 2 мг/л). Одержані пагони-регенеранти пересаджують на свіже поживне середовище такого ж складу, але додають індолілмасляну кислоту в кількості 0,5 мг/л, а БАП і НОК виключають.

9. Пагони відділяють групами, захоплюючи тканину, на якій вони регенеровані, щоб не пошкодити конус наростання пагона, який знаходиться при самій її основі. Після підростання пагони розділяють і по одному пересаджують у нові пробірки на свіже поживне середовище.

10. Протягом 3-4 місяців відбувається вкорінення і підрощування рослин-регенерантів.

11. Після періоду підрощування слід оглянути рослини-регенеранти, схематично їх замалювати і зробити відповідні висновки, порівнюючи регенеруючу здатність різних сортів часнику між собою в умовах in vitro.