ЛАБОРАТОРНА РОБОТА 15.

ВИРОЩУВАННЯ СТЕРИЛЬНИХ ПАРОСТКІВ РІЗНИХ СІЛЬСЬКОГОСПОДАРСЬКИХ РОСЛИН

МЕТА: навчитись методів вирощування стерилізації паростків сільськогосподарських рослин.

МАТЕРІАЛИ І УСТАТКУВАННЯ: насіння сої, гороху, квасолі, огірків, помідорів та ін.; стерильні чашки Петрі, стерильні конічні колби на 300 -500 мл, дно яких вкрите зволоженою ватою або фільтрувальним папером, пробірки з половинним поживним середовищем М-С без гормонів, стерильна вода, стерильні хімічні стакани, стерильні пінцети, стерильні марлеві мішечки, 0,1 %-й розчин сулеми, 96 %-й етиловий спирт.

Пояснення

Стерильні паростки вирощують з метою одержання експлантів для введення в калусну або пухлинну культуру. Залежно від завдання досліду насіння пророщують на воді або на агаризованому поживному середовищі.

Після одержання стерильних паростків вони можуть бути використані у двох напрямках:

1) як джерело одержання експлантів з диференційованих тканин, які при перенесенні на поживне середовище з наявністю у ньому фітогормонів дедиференціюються і в результаті інтенсивної проліферації утворюють калусну тканину;

2) для одержання первинного калусу безпосередньо на паростках, який може бути ізольований і перенесений у стерильних умовах на поживне середовище, що містить фітогормони, з метою дальшого культивування.

ХІД РОБОТИ

1. Відібрати 10 здорових, однакових за розмірами насінин дводольних і однодольних культур.

2. Ретельно промити насіння в мильному розчині, потім водопровідною і дистильованою водою.

3. Помістити насіння в марлеві мішечки і опустити на 1-2 хв в 96 %-й спирт, після чого простерилізувати в 0,1 %-му розчині сулеми, діациду протягом 15 хв.

4. Після стерилізації насіння добре промити в стерильній воді змінюючи її 5-6 разів.

5. У ламінарі з допомогою стерильного пінцета розкласти 10 насінин (крупнонасінних культур) у стерильну колбу, дно якої застелене вологою ватою або фільтрувальним папером.

6. Дрібне насіння (тютюну, моркви, картоплі і т.д.) можна пророщувати в чашках Петрі на фільтрувальному папері, який добре змочений стерильною водою.

7. Для одержання стерильних паростків на поживному середовищі помістити по одній насінині (цих же культур) в пробірку із стерильним середовищем М-С (половинна його концентрація).

8. Колби, чашки Петрі і пробірки з насінням поставити в термостат при температурі + 25-26°С. Для одержання не етильованих паростків насіння слід пророщувати на світлі за такої ж температури. Через тиждень розглянути і замалювати результати досліду. Порівняти розвиток паростків, які знаходилися у воді і на поживному середовищі М-С. Зробити відповідні висновки.